Microinyección pronuclear de DNA plasmidico

Descripción del servicio

1. Inserción aleatoria en cepas yw o cepas w (P-element transform) Para cada construcción se enviarán 10 microgramos de ADN en un volumen máximo de 100 microlitros. El ADN helper a usar será "delta 2-3" y lo proporcionará el servicio, que también se encargará de preparar la mezcla de inyección. 2.Inserción dirigida (PhiC31 system) Este método se basa en el artículo: "An optimized transgenesis system for Drosophila using germ-line-specific fC31 integrases" Bischof et al. PNAS February 27, 2007. (3312-3317) Las construcciones deberán enviarse a una concentración mínima de 300 nanogramos/microlitro, y un volumen mínimo de 10 microlitros de cada muestra. El servicio de inyección dispone de las siguientes líneas: ZH-attP-22A: inserción en 2L-22A ZH-attP-51D: inserción en 2R-51D ZH-attP-68E: inserción en 3L-68E ZH-attP-86Fb: inserción en 3R-86F 3.Inserción en el sistema CRISPR Basándonos en el método descrito en el artículo: "Highly Improved Gene Targeting by Germline-Specific Cas9 Expression in Drosophila" Shu Kondo1 and Ryu Ueda. Genetics. 2013 Nov;195(3):715-21 Las construcciones deberán enviarse a una concentración mínima de 250 nanogramos/microlitro y un volumen mínimo de 10 microlitros. Los stocks disponibles son los siguientes: 25C: inserción en 2L 68A: inserción en 3L Nos-cas9: inserción aleatoria