Citometría de flujo

El servicio de citometría de flujo está diseñado como instrumento de apoyo a todos los grupos que trabajan directa o indirectamente en el área de la biología celular. Para ello las células son marcadas con sondas fluorescentes y sometidas a análisis o separación celular mediante citómetros de flujo Actualmente el servicio dispone del siguinete equipamiento y medio de trabajo: -Dos analizadores, modelos Cytoflex- (Beckman Coulter) y un espectral Aurora 4L (Cytek) -Separador (cell sorter) modelo FACSAria Fusion (Becton Dickinson), -Software específico de análisis

Se ofrecen instalaciones, equipamiento, soporte técnico, formación y recursos analíticos al personal del centro. Estas infraestructuras y recursos humanos se usan en proyectos de investigación con diferentes objetivos que abarcan todo el espectro de ecología molecular: identificar el sexo de los individuos, identificar individuos de poblaciones salvajes mediante sus heces, determinar relaciones de parentesco entre individuos, detectar cambios demográficos a partir de marcadores neutrales o utilizar marcadores de genes bajo selección para entender procesos evolutivos. Los marcadores nucleares se pueden desarrollar, optimizar y tipar para conocer mejor las relaciones entre individuos, poblaciones y especies. Se ofrece asimismo la posibilidad de secuenciar tanto genes diana mediante secuenciación Sanger como secuenciación de nueva generación de genomas enteros para estudios de genética poblacional, genética funcional y filogenias. las técnicas basadas en ARN están actualmente en expansión

Ofrecemos apoyo científico-técnico a grupos de investigación del IATA así como a otros centros de investigación o empresas que deseen utilizar técnicas de estudio global de genomas y de expresión génica. Incluye las técnicas de microarrays de DNA y PCR cuantitativa a tiempo real. Ofrecemos también servicios relacionados, como extracción de ácidos nucleicos a partir de distintos tipos de muestras, cuantificación y control de calidad de las muestras. Por otraparte Este servicio también permite el análisis de proteínas a partir de mezclas complejas con alta reproducibilidad y alta resolución.

Fundamento: La citometría de flujo es una técnica de análisis multiparamétrico cuyo principio está basado en el paso de una suspensión de partículas (generalmente células) alineadas a través de un haz de luz monocromatico (láser). Equipamiento: - Analizador BD FacsCalibur: 2 láseres excitación (488 y 633 nm). 4 detectores de fluorescencia - Analizador BD FacSymphony: 5 láseres excitación (355, 405, 488, 561 y 633 nm). 30 detectores de fluorescencia. Dispensador de placas acoplado de 96-384 pocillos. - Separador BD FacsAria III: 4 láseres excitación (405, 488, 561 y 633 nm). 16 detectores de fluorescencia - Bioplex 200 (tecnología luminex) lector en placa Técnicas: - Análisis complejo multiparamamétrico - Identificación de genes reporteros - Proliferación celular - Apoptosis y necrosis - Viabilidad celular - Ciclo celular - Ensayos funcionales - Análisis multiparamétrico de moléculas en solución (Bioplex) - Separación cellular - Análisis de datos con herramienta

Con el objetivo de maximizar la transferencia de tecnología a las empresas, a otras instituciones de investigación y a la sociedad en general, el IBB creó en 2013 una unidad de servicios (CertIBB). Esta unidad ofrece servicios de formación, análisis y consultoría basados en su personal científico y técnico y sus instalaciones especializadas. El servicio de certificaciones y análisis del IBB tiene la misión de proporcionar a otros centros de investigación, empresas y a la sociedad en general, una serie de herramientas y técnicas moleculares y taxonómicas, así como la prestación de consultoría y formación a través de los servicios. Para ello, el IBB dispone de personal científico y técnico de experiencia probada, de un herbario de referencia con 800000 pliegos, una biblioteca especializada, laboratorios completamente equipados, cámaras de cultivo, invernaderos y mariposario.

El objetivo del servicio fundamentalmente es el análisis y separación de poblaciones celulares de muestras tanto animales como humanas de los distintos laboratorios del instituto y de otras entidades públicas o privadas (servicio externo) gracias a las mediciones de fluorescencia, tamaño y complejidad que nos aportan los citómetros. Del mismo modo se asesora tanto en la preparación de las muestras como en el posterior análisis de datos obtenidos.

El Instituto Cajal posee un citómetro de flujo analizador BD FACSsymphony equipado con 5 láseres separados espacialmente: 355nm, 405nm, 488nm, 561nm y 637nm. Este equipo nos permite analisis multiparamétrico de células pudiendo detectar de forma simultánea hasta 30 parámetros y 28 fluorescencias. Además, la unidad posee dos separadores celulares BD FACS ARIA Fusion y BD FACSAria. El primero, localizado en el interior de una cabina de flujo, está equipado con 4 láseres separados espacialmente (355nm, 405nm, 488nm y 640nm) y permite la detección simultanea de hasta 19 parámetros y 17 fluorescencias. Por otro lado, el segundo, posee dos láser enfriados por aire: un láser de Argón de 488 nm y un láser de Helio-Neon de 633 nm, permitiendo la detección de 7 fluorescencias, junto con dos los dos parámetros de scatter (tamaño y complejidad celular).

El Centro de Investigación en Sanidad Animal (CISA) es una instalación reconocida como Infraestructura Científica y Técnica Singular (ICTS) que cuenta con laboratorios y animalario de nivel 3 y 3+ (NCB3 y NCB3+) que permiten abordar estudios en condiciones de alta Seguridad Biológica. El Servicio de Citometría de Flujo es un laboratorio NCB3 equipado con un citómetro analizador BD FACSCelesta SORP y un citómetro separador BD FACSAria III. Las aplicaciones de citometría en el CISA engloban desde técnicas rutinarias para la evaluación de la respuesta inmune en animales infectados o vacunados, hasta la cuantificación y el fenotipado de subpoblaciones leucocitarias, su activación y proliferación, ensayos de citotoxicidad y de producción de citoquinas. Además, es un servicio donde se testan la mayoría de los candidatos vacunales frente a SARS-CoV-2. La separación de subpoblaciones celulares para su estudio individualizado es también posible.

El objetivo principal del Servicio de Transformación Genética y Cultivo in Vitro de Plantas del IHSM es proporcionar apoyo a los grupos de investigación del Instituto y otros OPIs, así como a empresas del sector agrícola que pudieran estar interesadas, en la aplicación de herramientas biotecnológicas esenciales para la manipulación genética y la clonación de plantas. En concreto: 1. Transformación mediada por Agrobacterium tumefaciens de fresa (Fragaria x ananassa), Nicotiana benthamiana, Solanum lycopersicum y Prunus domestica. 2. Técnicas de cultivo in vitro de fresa, olivo y Prunus (Establecimiento, multiplicación y mantenimiento de cultivos in vitro). 3. Asesoramiento en la puesta a punto de protocolos de transformación, regeneración y edición genética (CRISPR/Cas).

El Servicio de Citometría (SGC) es una plataforma de investigación común de uso abierto a todos los miembros del Instituto (Centro de Investigación del Cáncer) así como a otros grupos clínicos y de investigación externos. Su objetivo es apoyar la investigación y la educación en citometría. Las actividades más relevantes incluyen el análisis y clasificación celular con fines de investigación, con más de 50 técnicas diferentes actualmente establecidas y disponibles en el área de inmunofenotipado, análisis del ciclo celular, apoptosis, resistencia a fármacos y cribado, cuantificación de proteínas fosforiladas y sus vías de señalización intracelular asociadas, entre otras. Además, proporciona pruebas de apoyo al diagnóstico de cáncer que sirven de plataforma común para el diagnóstico inmunofenotípico de leucemias y linfomas para el RTICC español del Instituto de Salud Carlos III. Paralelamente, en el SGC hay varios proyectos de investigación en curso orientados a la tecnología.

Los citómetros de flujo tienen la capacidad de medir de forma rápida y consistente múltiples parámetros y marcadores celulares en muestras complejas, sus aplicaciones son numerosas, lo que ha propiciado el uso generalizado de estos instrumentos en la investigación biológica. Las principales aplicaciones que hemos desarrollado en el centro son: Análisis: • Ensayos de viabilidad celular • Potencial de membrana • Inmunofenotipado multiparamétrico • Análisis del ciclo celular • Apoptosis y necrosis Separación celular: - Células madre (ratón) - Líneas celulares - Células de discos de Drosophila (ojos y alas) - Células hematopoyéticas (sangre, riñón, hígado, médula ósea, bazo y timo de ratón) Actualmente el servicio dispone del siguiente equipamiento para análisis y separación celular: FacsAria II BD: 2 láseres (488nm y 633nm) SonyMa900 : 4 láseres en dos ejes 488/561 y 405/638)

Se encarga de preparación de protocolos y asesoramiento para estas técnicas, la obtención de datos y el análisis de los resultados. Este servicio está destinado a todos los grupos de investigación que se relacionan sobre todo con el área de la biología celular y los microrganismos. Se utilizan distintas técnicas con colorantes fluorescentes y anticuerpos específicos que nos permiten contrastar e implementar los resultados obtenidos. Actualmente el servicio consta de un citómetro de flujo analizador FACScalibur (BD) dotado de dos láseres, un láser de Argón de 488 nm y un láser de Helio-Neon de 633 nm gracias a los que podemos realizar análisis multiparamétricos de hasta 4 marcadores fluorescentes. Microscopia ZEISS AXIO SCOPE A1 que nos permite ver tanto fluorescencia como luz transmitida, un micrsocopio confocal ZEISS LSM800 implementado con cámara de CO2 y control de temperatura para imágenes in vivo y un microscopio de última generación PHASE VIEW ALPHA 3 que aborda las necesidad