Determinación de modificaciones postraduccionales

Descripción de la prestación

La identificación de modificaciones postraduccionales implica, en la mayor parte de los casos, un paso previo de enriquecimiento en la modificación estudiada. El uso de técnicas de afinidad, como el IMAC o el óxido de titanio en el caso de los péptidos fosforilados, o de inmunoafinidad, como en el estudio de la acetilación, la ubiquitinación o la fosforilación en tirosina, es un paso previo a la identificación por espectrometría de masas.

Descripción de la prestación

Las modificaciones postraduccionales (PTMs) de las proteínas se determinan principalmente mediante espectrometría de masas acoplada a cromatografía líquida (LC-MS/MS). Este tipo de análisis requiere, tras la extracción y digestión enzimática de las proteínas, de un enriquecimiento o purificación de los péptidos que contienen modificaciones específicas (fosforilación, acetilación, ubiquitinación o glicosilación) mediante estrategias selectivas. En el caso del análisis de fosforilaciones se realiza un enriquecimiento de los fosfopéptidos mediante el uso de resinas de TiO₂ o IMAC. Esta prestación hace referencia exclusivamente a este proceso de enriquecimiento. Posteriormente, los péptidos se separan cromatográficamente, se ionizan y se analizan por espectrometría de masas para determinar su masa y secuencia. La comparación entre las masas observadas y las esperadas permite identificar la presencia de las diferentes modificaciones. Los espectros de fragmentación (MS/MS) permiten además localizar con precisión el aminoácido modificado. Finalmente, los datos se procesan mediante herramientas bioinformáticas que asignan las PTMs, estiman su abundancia relativa y validan la confianza de las identificaciones. Este enfoque proporciona una caracterización sensible, específica y de alto rendimiento de las modificaciones postraduccionales presentes en muestras biológicas de diferente complejidad.