Coomassie Gel Staining

La tinción de geles con Coomassie es una tinción lista para usar basada en el colorante coomassie coloidal G-250 que permite la detección a nivel de nano gramos así como una claridad excelente en geles de poliacrilamida.
Este colorante solo tiñe proteínas y, a diferencia de las tinciones tradicionales con coomassie basadas en la forma del colorante R-250, permite que las bandas se vean directamente en el gel durante el proceso de tinción. Después de la tinción, una etapa opcional de lavado con agua aumenta la sensibilidad y clarifica el fondo.
Protocolo:
1. Lavar el gel tres veces con metanol-acético en agua (50:10:40) 15 minutos.
2. Lavar el gel tres veces con agua MQ 15 minutos.
3. Añadir el coomassie coloidal 1 hora/over night.
4. Para aumentar la claridad usar la etapa de lavado con agua (1 hora).
Instrucciones para el usuario:
1. Los solventes empleados deben de ser de alto grado análitico.
2. El recipiente utilizado será preferiblemente nuevo.
3. Los usuarios extremarán la precaución en la manipulación para evitar la contaminación con queratinas.
4. Los usuarios traerán el gel al Servicio en metanol-acético-agua (50:10:40).

El Coomassie Brilliant Blue es un pigmento del tipo trifenilmetano aniónico, que se une de forma no covalente a los residuos de lisina de las proteínas. El límite de detección es 1mg de proteína por punto. Es compatible con la mayoría de métodos de análisis incluyendo MS y microsecuenciación Edman.

Método convencional para la visualización rápida y general de proteínas separadas mediante electroforesis en gel. Menos sensible que la tinción de plata.
El Azul de Coomassie es un colorante orgánico que forma complejos fuertes no covalentes con las proteínas mediante una combinación de fuerzas de Van der Waals y la interacción con aminoácidos básicos como arginina, lisina y histidina, así como con tirosina. La incorporación del colorante es proporcional a la cantidad de proteína. La afinidad del colorante depende de la proteína y se correlaciona con el contenido de aminoácidos básicos.
Para la tinción, el colorante se añade al gel disuelto en metanol/agua/ácido acético, se incuba por un periodo de 5-20 minutos y finalmente el gel se destiñe con metanol/agua/ácido acético durante 1-24 horas. Este método tiene un límite de detección de 30 a 100 ng de proteína.
La sensibilidad de este método convencional puede mejorarse utilizando altas temperaturas durante el proceso de tinción y desteñido o utilizando una tinción de Coomassie coloidal. Este último método permite la detección de proteínas en el rango de 8-50 ng aunque necesita aproximadamente 1-2 días para realizarse. Para la tinción con Coomassie coloidal, las proteínas en el gel se someten a un paso de fijación con metanol/agua/ácido acético. Seguidamente, el gel se incuba 12-18 horas con una solución de Coomassie que contiene sulfato amónico y ácido fosfórico. Para desteñir el gel se utiliza agua y el proceso se puede acelerar utilizando una temperatura de 45-44 grados.