Caracterización funcional de enzimas del metabolismo de ácidos grasos poliinsaturados

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La función enzimática se determina mediante la expresión de la región codificante de la secuencia génica de interés en células de levadura Saccharomyces cerevisiae. En resumen, la región codificante del gen de interés se amplifica con cebadores que contienen sitios de restricción para su posterior clonación en el vector de expresión de levaduras pYES2. Los plásmidos purificados que contienen las regiones codificantes de los genes de interés se transforman en células competentes de levadura S. cerevisiae. Una sola colonia de levadura se cultiva en medio selectivo hasta producir un cultivo con la densidad celular necesaria para efectuar el ensayo funcional. Para evaluar el papel de la enzima en la biosíntesis de ácidos grasos poliinsaturados (PUFA), se suplementan los frascos individuales de levadura transgénica con sustratos de ácidos grasos. El ensayo se completa con el análisis de ácidos grasos de los cultivos de levadura (precio no incluido), evaluando la conversión de los sustratos en los productos correspondientes.