Resonancia de plasmón de superficie: SPR

Descripción de la prestación

SPR Proporciona información sobre la cantidad relativa de masa ligada en una interfase solución/oro durante un tiempo determinado en interacciones moleculares

Descripción de la prestación

La unidad pertenece al Instituto de Química Médica (IQM) y proporciona apoyo al personal investigador del IQM, a otros centros del CSIC, así como a diversos organismos externos (Universidad, OPIs, Centros privados, etc.). Dispone de un equipo Biacore X-100 que permite detectar y monitorizar interacciones entre dos o más moléculas en tiempo real sin emplear ningún tipo de marcaje. El tipo de interacciones estudiadas pueden ser: proteína-proteína, proteína-péptido, proteína-molécula pequeña, péptido-péptido y ADN-molécula pequeña. Los experimentos que pueden llevarse a cabo permiten determinar la especificidad entre dos o más ligandos y/o caracterizar la cinética y afinidad de dicha interacción. Con el análisis de los datos se obtienen las constantes de velocidad así como las de asociación/disociación del complejo formado. En el campo de la Química Médica y Biológica la tecnología de Resonancia de Plasmón de Superficie (SPR) es una de las más novedosas ya que debido a su gran sensibilidad puede detectar interacciones directas del tipo fármaco-diana siendo una técnica muy útil a la hora de estudiar interacciones moleculares en los procesos implicados en el desarrollo de un fármaco. Las condiciones del servicio de SPR se dividen en cinco etapas que se describen a continuación: -Diseño experimental. Debido a la versatilidad que ofrece este equipo se realiza un diseño detallado y particular de los ensayos a realizar. Dicho diseño puede ser de distinta índole en función del tipo de interacción y de las condiciones iniciales de las muestras que se desean investigar. Para ello se hace un estudio previo del sistema que será clave para obtener buenos resultados. -Preparación de los tampones necesarios para la medida. Se lleva a cabo por el propio servicio, y siempre se emplean filtrados siguiendo los requisitos específicos del sistema y del equipo, además de prepararse exclusivamente para cada usuario. -Desarrollo experimental. En esta etapa se emplea una rigurosa metodología que incluye un compromiso de calidad tanto en la preparación de las muestras como en la realización de los ensayos. El proceso de preparación de las muestras tiene como requisito imprescindible el filtrado de las mismas, siendo además muy importante la preparación `in situ'. Con respecto a los ensayos, éstos siempre se realizan por triplicado asegurando así la fiabilidad de los resultados. Además en cada experimento se incluyen los controles necesarios que confirman el óptimo desarrollo del experimento. -Evaluación de los datos experimentales. Los datos se evalúan mediante un software específico del equipo Biacore X-100 que contiene las ecuaciones y modelos de ajustes específicos que permite la obtención de resultados de alta calidad y rápidamente, en comparación con otros equipos. -Informe de los resultados. Dicho informe describe el tipo de interacción estudiada de forma detallada, así como parámetros cinéticos y/o termodinámicos. La información cinética incluirá los valores de unión del sistema de estudio y, en los casos en los que sea posible, las constantes de velocidad de asociación y disociación del complejo. Además, se detalla la estequiometría y el modelo de la interacción que describe el sistema. La información mediante las medidas en el equilibrio aportará la constante de afinidad.

Descripción de la prestación

La Plataforma de Proteómica y Bioquímica realiza estudios de interacciones moleculares mediante Resonancia de Plasmón de Superficie utilizando la tecnología Biacore. Para ello, el laboratorio cuenta con un equipo Biacore X100.