Corte de muestras por ultramicrotomo para TEM

Descripción del servicio

El poder de penetración de los electrones generados en un microscopio de 100 kV ó 120kV se limita a unos 100- 150 nm para el material biológico, por lo que para tener una imagen de transmisión hay que obtener cortes por debajo de este grosor cuando trabajamos con la mayoría de las muestras biológicas: células o tejidos. En el caso de muestras pequeñas, particuladas, como complejos de proteínas, virus,vesículas o fracciones subcelulares podemos observarlas en el TEM sin necesidad de obtener cortes. La ultramicrotomía es un procedimiento que permite obtener secciones muy finas de material embebido en una resina lo suficientemente dura. La obtención de secciones implica el tallado del bloque y la obtención de cortes semifinos (1 micrometro) para localizar en el microscopio óptico la zona de interés y la posterior obtención de los cortes ultrafinos con una cuchilla de diamante. Los cortes se recogen sobre rejillas de microscopía electrónica. Para proporcionar mayor contraste a los electrones los cortes montados en las rejillas se tiñen con Acetato de Uranilo y Citrato de Plomo . Una alternativa a la inclusión en resina es la congelación de las células o tejidos, debidamente fijados y crioprotegidos, y la obtención de criosecciones en un crioultramicrotomo. En estos cortes las células permanecen hidratadas y se protegen con una película de metilcelulosa para ser observados en el TEM.