Separación Celular por Citometría de Flujo (Cell Sorting)

El servicio de citometría de flujo está diseñado como instrumento de apoyo a todos los grupos que trabajan directa o indirectamente en el área de la biología celular. Para ello las células son marcadas con sondas fluorescentes y sometidas a análisis o separación celular mediante citómetros de flujo Actualmente el servicio dispone del siguinete equipamiento y medio de trabajo: -Dos analizadores, modelos Cytoflex- (Beckman Coulter) y un espectral Aurora 4L (Cytek) -Separador (cell sorter) modelo FACSAria Fusion (Becton Dickinson), -Software específico de análisis

El Servicio de Citometría de flujo del Centro Nacional de Biotecnología desarrolla su labor en el marco de los diferentes programas de investigación del centro. Además de dar servicio a los usuarios de Citometría, el personal del Servicio pone a punto los diferentes sistemas de trabajo y desarrolla nuevas metodologías antes de ponerlas a disposición de los usuarios. El Servicio da soporte técnico y tecnológico tanto a los diferentes grupos del centro que los soliciten, como a diferentes grupos del sector público o privado El Servicio ofrece: Formación y Supervisión en Citometría de Flujo y en el uso de los diferentes Citómetros del Centro. Elaboración, optimización y actualización de los protocolos . Análisis y presentación de resultados con diferentes softwares especializados. Puesta a punto de diferentes aplicaciones, Cuantificación de citoquinas solubles mediante ensayos de multiplexado. Aislamiento celular por Cell Sorting . Anticuerpos y reactivos de uso común

La citometría de flujo es una de las técnicas que ha experimentado un mayor desarrollo en los últimos años. Ésta técnica proporciona datos multiparamétricos relativos a las características físicas y químicas de células o partículas en suspensión. Nuestro Servicio de Citometría de Flujo proporciona equipamiento y asistencia profesional para la realización de una amplia gama de análisis mediante citometría de flujo. Estos incluyen des del inmunofenotipaje más convencional a ensayos de biología celular (apoptosis, ciclo celular, la proliferación...), estudios de transducción de señal (fosforilación, movilización de Ca2 +), detección de moléculas solubles (citoquinas…), estudios genéticos y de ploidía. El Servicio dispone también de un separador de partículas (cell sorter) que permite la separación física de subpoblaciones con diferentes características de fluorescencia. El Servicio también proporciona asesoramiento en el diseño de experimentos, proporciona protocolos, y suminist

Fundamento: La citometría de flujo es una técnica de análisis multiparamétrico cuyo principio está basado en el paso de una suspensión de partículas (generalmente células) alineadas a través de un haz de luz monocromatico (láser). Equipamiento: - Analizador BD FacsCalibur: 2 láseres excitación (488 y 633 nm). 4 detectores de fluorescencia - Analizador BD FacSymphony: 5 láseres excitación (355, 405, 488, 561 y 633 nm). 30 detectores de fluorescencia. Dispensador de placas acoplado de 96-384 pocillos. - Separador BD FacsAria III: 4 láseres excitación (405, 488, 561 y 633 nm). 16 detectores de fluorescencia - Bioplex 200 (tecnología luminex) lector en placa Técnicas: - Análisis complejo multiparamamétrico - Identificación de genes reporteros - Proliferación celular - Apoptosis y necrosis - Viabilidad celular - Ciclo celular - Ensayos funcionales - Análisis multiparamétrico de moléculas en solución (Bioplex) - Separación cellular - Análisis de datos con herramienta

El objetivo del servicio fundamentalmente es el análisis y separación de poblaciones celulares de muestras tanto animales como humanas de los distintos laboratorios del instituto y de otras entidades públicas o privadas (servicio externo) gracias a las mediciones de fluorescencia, tamaño y complejidad que nos aportan los citómetros. Del mismo modo se asesora tanto en la preparación de las muestras como en el posterior análisis de datos obtenidos.

El Instituto Cajal posee un citómetro de flujo analizador BD FACSsymphony equipado con 5 láseres separados espacialmente: 355nm, 405nm, 488nm, 561nm y 637nm. Este equipo nos permite analisis multiparamétrico de células pudiendo detectar de forma simultánea hasta 30 parámetros y 28 fluorescencias. Además, la unidad posee dos separadores celulares BD FACS ARIA Fusion y BD FACSAria. El primero, localizado en el interior de una cabina de flujo, está equipado con 4 láseres separados espacialmente (355nm, 405nm, 488nm y 640nm) y permite la detección simultanea de hasta 19 parámetros y 17 fluorescencias. Por otro lado, el segundo, posee dos láser enfriados por aire: un láser de Argón de 488 nm y un láser de Helio-Neon de 633 nm, permitiendo la detección de 7 fluorescencias, junto con dos los dos parámetros de scatter (tamaño y complejidad celular).

El Centro de Investigación en Sanidad Animal (CISA) es una instalación reconocida como Infraestructura Científica y Técnica Singular (ICTS) que cuenta con laboratorios y animalario de nivel 3 y 3+ (NCB3 y NCB3+) que permiten abordar estudios en condiciones de alta Seguridad Biológica. El Servicio de Citometría de Flujo es un laboratorio NCB3 equipado con un citómetro analizador BD FACSCelesta SORP y un citómetro separador BD FACSAria III. Las aplicaciones de citometría en el CISA engloban desde técnicas rutinarias para la evaluación de la respuesta inmune en animales infectados o vacunados, hasta la cuantificación y el fenotipado de subpoblaciones leucocitarias, su activación y proliferación, ensayos de citotoxicidad y de producción de citoquinas. Además, es un servicio donde se testan la mayoría de los candidatos vacunales frente a SARS-CoV-2. La separación de subpoblaciones celulares para su estudio individualizado es también posible.

El Servicio de Citometría (SGC) es una plataforma de investigación común de uso abierto a todos los miembros del Instituto (Centro de Investigación del Cáncer) así como a otros grupos clínicos y de investigación externos. Su objetivo es apoyar la investigación y la educación en citometría. Las actividades más relevantes incluyen el análisis y clasificación celular con fines de investigación, con más de 50 técnicas diferentes actualmente establecidas y disponibles en el área de inmunofenotipado, análisis del ciclo celular, apoptosis, resistencia a fármacos y cribado, cuantificación de proteínas fosforiladas y sus vías de señalización intracelular asociadas, entre otras. Además, proporciona pruebas de apoyo al diagnóstico de cáncer que sirven de plataforma común para el diagnóstico inmunofenotípico de leucemias y linfomas para el RTICC español del Instituto de Salud Carlos III. Paralelamente, en el SGC hay varios proyectos de investigación en curso orientados a la tecnología.