Producción de anticuerpos policlonales y monoclonales

Descripción de la prestación

El servicio, que se adapta a la necesidad de cada cliente, puede producir anticuerpos frente a proteínas, péptidos, moléculas orgánicas u otros antígenos, a través de protocolos estandarizados o personalizados, y haciendo especial énfasis en la fase de diseño del inmunógeno, un aspecto esencial para modular la selectividad y afinidad del anticuerpo. Es, además, uno de los pocos laboratorios que ofrece el servicio de asesoramiento y asistencia en relación a la preparación de inmunógeno y producción de anticuerpos para moléculas de bajo peso molecular, como pigmentos, hormonas o anabolizantes, así como péptidos. El inmunógeno lo puede aportar el usuario o puede ser diseñado y sintetizado o bioconjugado en el mismo servicio de producción de anticuerpos. Tanto para la producción de anticuerpos monoclonales como policlonales, los protocolos y el cuidado de los animales de experimentación se realiza según las especificaciones del Real Decreto 53/2013, sobre ¿Protección de los animales utilizados para experimentación y otros fines científicos¿. Desarrollo y producción de anticuerpos monoclonales: El servicio de Producción de Anticuerpos Monoclonales se basa en la línea de ratón Balb-c., e incluye las siguientes fases: - PRELIMINAR: Discusión sobre los detalles del proyecto (sistema de cribado, criterio de selección, requisitos especiales), planificación y preparación del trabajo. -INMUNIZACIÓN, FUSIÓN CELULAR, SELECCIÓN Y CRIBADO: Inmunización de al menos 4 ratones (Balb-C), cultivo de células de mieloma de la línea P3x63Ag8.653, fusión celular, selección y cribado. -CLONACIÓN: Clonación, cribado y cultivo de los hibridomas positivos. La clonación se llevará a cabo por el método de dilución límite. El usuario recibirá, si lo cree conveniente, el sobrenadante de cultivo necesario de cada clon positivo para testarlo por medio de su propio sistema. -CRIOPRESERVACIÓN: Se criopreservarán tres viales por cada clon estable positivo. Los crioviales y 10 ml del sobrenadante del cultivo de cada clon positivo serán enviados al cliente. -CARACTERIZACIÓN DE LOS CLONES SELECCIONADOS: Se determinará el isotipo Ig y se realizará un test de detección de micoplasma. Se emitirá el informe correspondiente. Las líneas celulares de hibridomas se cultivan in vitro para la PRODUCCION de anticuerpos monoclonales in vitro, que se realiza a pequeña escala o con la utilización de biorreactores. Producción de anticuerpos policlonales: El servicio dispone de un protocolo estándar de inmunización que incluye inoculaciones mensuales con adyuvante de Freund durante un periodo de 4 meses. Dicho protocolo se puede adaptar a las necesidades de los antisueros requeridos, teniendo en cuenta las características del inmunógeno y las características requeridas del anticuerpo. Para determinar el progreso de la respuesta inmune, se realiza una sangría transcurridos 10 días desde de la segunda inoculación para obtener el suero y determinar el título de anticuerpos mediante ELISA. Entre los controles se incluye la obtención de suero preinmune de los animales de experimentación, obtenido de una sangría previa a la primera inyección. Al final del proceso se procede a la sangría completa del animal mediante un proceso quirúrgico bajo anestesia. Habitualmente se obtienen de 50-70 mL de suero hiperinmune por animal. Servicios adicionales a la producción de anticuerpos: -Purificación de anticuerpos -Isotipado de los anticuerpos monoclonales generados -Conjugación de los anticuerpos o antígenos -Almacenamiento de hibridomas en N2 líquido -Inmunoensayos