Analisis por microscopía convencional

Disponemos de seis microscopios de campo ancho dotados con cámaras digitales monocromas y de color para adquirir imágenes con luz transmitida (campo claro, contraste de fases y Nomarski/DIC) y fluorescencia. También disponemos del programa para procesamiento y valoración de imágenes Metamorph (Molecular Devices) y del programa Huygens (S.V.I) para Deconvolución.
Tres de ellos con cámaras de incubación con control de temperatura, humedad y CO2 para realizar estudios in vivo de larga duración.
Disponemos de dos sistemas de perfusión:
1) Sistema de perfusión "Open Diamond Bath Imaging Chambers for Round Coverslips (RC-25, RC-25F)" con "Eight Channel Perfusion Valve Control System (VC-8)" de Warner Instruments/Harvard Apparatus acoplado al microscopio de campo ancho AF6000 FX de Leica.
2) Sistema de perfusión POCmini de Pecon con un sistema de inyección para un máximo de dos jeringuillas que puede ser utilizado en cualquiera de nuestros microscopios.
Disponemos asimismo del programa Huygens (SVI) para realizar la deconvolución de estos experimentos para mejorar la resolución óptica de las imágenes.
Para obtener detalles de las características y componentes de nuestros equipos dirigirse a nuestra página Web: http://www.cbm.csic.es/confocal
Experiencia desde 2000.
Para su utilización contactar con el personal del SMOC:
Telf: 34-91 196 4643
E-mail: confocal-cbm@listas.csic.es

Realización de experimentos multiposición a lo largo del tiempo (time-lapse) utilizando técnicas de microscopía por luz transmitida: campo claro, contraste de fases o DIC (Nomarski). Posibilidad de adquisición de series en z en cada posición.
Ejemplos de aplicaciones: movimiento celular o de partículas (tracking),cierre de heridas (wound-healing), migración, quimiotaxis, procesos de división o muerte celular celular, etc.

Permite la observación microscópica y la microfotografía digital de distintos tipos de muestras.
Estas muestras pueden observarse a distintas magnificaciones gracias a la diversidad de objetivos disponibles (4x, 20x, 40x, 100x) y utilizando diferentes técnicas de microscopía óptica como:
campo claro
luz polarizada
contraste de fases
contraste interdiferencial o Nomarsky

2 Microscopios ópticos con adaptador para cámara fotográfica:
Nikon Eclipse E-800.
Nikon Eclipse E-2000 con lentes invertidas.

El Laboratorio de Micromorfología de la EEAD puede impregnar con resina plástica muestras de suelos, de sedimentos y de otros materiales, tanto pétreos como no consolidados. Los bloques impregnados se cortan con sierra diamantada para tener tabletas con una cara plana. También se pueden fabricar cortes delgados de 25 µm de espesor para su estudio con luz polarizada. El desbaste y rectificación se hacen con aceite ligero consiguiendo así respetar los minerales solubles en agua.
Los tamaños estándar de nuestras tabletas y cortes delgados montados sobre portaobjetos son 135 × 58 mm o bien 58 mm × 45 mm. Eestos tamaños permiten detectar rasgos mesomorfológicos como estructura edáfica o sedimentaria, rasgos de fauna, distribución de elementos detríticos o de industrias líticas, restos vegetales o animales, etc. Se pueden cubrir los cortes delgados con cubreobjetos del tamaño adecuado. Preparaciones así obtenidas se han conservado en perfectas condiciones para su estudio durante más de 30 años.

- Observación de cultivos celulares con microscopios de contraste de fases para ver la morfología celular y estado general del cultivo.
- Análisis en microscopio de fluorescecia de muestras de cultivos celulares teñidas con Hoechst 33258 para valorar su posible contaminación por micoplasmas.

La caracterización de los materiales metálicos mediante microscopía óptica con iluminación en campo claro, en campo oscuro y luz polarizada comprende las características microestructurales como tamaño de grano, tamaño forma y distribución de las fases de que se compone el material, inclusiones, segregaciones y otras heterogeneidades, así como determinación de espesores de recubrimiento, profundidad de descarburación, clasificación de grafito en fundiciones...según normas metalográficas UNE EN ISO y ASTM

Procesado convencional de muestras de tejido animal para realizar análisis histológicos mediante microscopía óptica.
Procesado inmunohistoquímico de secciones histológicas para la detección de virus, bacterias y protozoos y la caracterización de poblaciones celulares (p.e. leucocitos, o células epiteliales) o la expresión de moléculas de interes (p.e. citoquinas, antígenos citoplasmáticos...).

Ofertamos diferentes microscopios de fluorescencia de campo ancho, tanto directos como invertidos, y las técnicas más usadas en microscopía óptica convencional como campo claro, contraste interdiferencial (DIC) y contraste de fases. Para dar este servicio contamos con los siguientes equipos:
Microscopio Nikon 90i, es motorizado, de luz transmitida y epifluorescencia con iluminacio led (P300 Coolled), con filtros UV-2E/C DAPI (Ex-340-380 Em-435-485), B-2E/C FITC (Ex-465-495 Em-515-550), Y-2E/C Red (Ex-540-580 Em-600-660), mCherry (Ex-537-587 Em-600-686) and Cy 5 HYQ (Ex-590-650 Em-663-738).
Tiene acopladas dos cámaras digitales Nikon, una refrigerada monocroma (DS-Qi1Mc) y otra a color para luz visible (DS-Fi1). El software utilizado para la captura y análisis de imágenes es el NisElements 3.01. Este equipo consta de los siguientes objetivos fijos: Plan-APO (4x/0.2, 20x/0.75, 40x/0.95, 60x/1.4 oil, 100x/1.4 oil) y Plan-Fluor 10x/0.3. En el servicio disponemos de un objetivo Plan- ACHROMAT 2x que se podrá utilizar a petición del usuario.
Microscopio Axiophot (Zeiss) de luz transmitida y epifluorescencia. Consta de filtros para DAPI, FITC y Rojo. Está acoplado a una camara DP70 (Olympus) con el sistema de captura de imágenes DP Controller. Los objetivos son Plan-NEOFLUAR (10x, 20x, 40x, 63x 100x). Disponemos de un objetivo ACHROPLAN 4x que se podrá colocar previa solicitud del usuario.
Microscopio invertido Axiovert 135 (Zeiss) de luz transmitida y epifluorescencia. Tiene filtros para DAPI, FITC y Rojo. Se encuentra acoplado a una cámara monocroma de Nikon (Ds-2MBWc) controlada por el programa NIS Elements F. 3.0. Los objetivos son ACHROSTIGMAT (10x, 20x, 32x) de Zeiss y 40x de Nikon.
Microscopio Nikon Eclipse E400 de luz transmitida y epifluorescencia. Tiene filtros para DAPI, FITC y TexasRed. Los objetivos disponibles son 10x/0.25, 20x/0.4, 40x/0.75, Plan-APOCHROMAT 60x/1.4 oil y Plan-Fluor 100x/1.3 oil. La cámara acoplada es la DP500 que utiliza para la captura de imágenes el sofware ViewFinder de Olympus.
Para poder usar los equipos es necesario ponerse en contacto con el servicio a través del teléfono 915854379 o del correo electrónico microscopia@iib.uam.es.

- Determinación de composición (analisis maceral) y rango (reflectancia de la vitrinita) en carbones. Aplicación a: estudios de caracterización de carbones, análisis de cuencas con carbón, determinación de mezclas de carbones, análisis de contaminantes en suministros de carbón, control de calidad de suministros de carbón, etc...
- Determinación de composición (tipo de materia orgánica y/o kerógeno) y madurez orgánica (reflectancia de la vitrinita y fluorescencia cualitativa y cuantitativa). Aplicación a: analisis de cuencas e historia geotermica, evaluación de combustibles fósiles, yacimientos convencionales y no convencionales de hidrocarburos (p.e.: pizarras bituminosas, rocas madre/generadoras, pizarras de gas), etc...
- Identificación y cuantificación de partículas orgánicas de tipo variado (p.e.: coke, grafitos, aditivos en ripios, etc...). Aplicacion a: control de calidad, contaminación del medio ambiente, etc...

Equipos disponibles:
- Microscopio de luz transmitida Nikon, modelo Eclipse E 1000 con objetivos de contraste de fases, luz polarizada y epifluorescencia y microfolografía digital.
- Microscopio de luz transmitida Zeiss, modelo Axioplan con luz visible y contraste de fases y microfotografía digital.
- Microscopio de luz transmitida invertido Leica, modelo CTR 4000 con objetivos de contraste de fases y epifluorescencia y microfotografía digital.
- Microscopio de luz transmitida invertido Olympus, modelo IX70 con contraste de fases y epifluorescencia y microfotografía digital.
- Microscopio estereoscópico (lupa) Wild modelo M420, con microfotografía digital.
Se ofrece la posibilidad de observación y realización de microfotografía digital con microscopio de luz transmitida o de fluorescencia, de muestras biológicas y de cortes de tejidos. La observación puede ser en régimen de autoservicio o mediante ayuda de personal especializado.
Se ofrece la posibilidad de observación y realización de microfotografía digital con microscopio invertido de luz transmitida o de fluorescencia, de cultivos celulares cultivados en placas de pocillos. La observación puede ser en régimen de autoservicio o mediante ayuda de personal especializado.
OBLIGACIONES DE LOS USUARIOS:
1) Leer y respetar las normas e instrucciones de uso de los equipos, tanto las colocadas en la página Web del IIBB (https://www.iibb.csic.es/ ) como las dispuestas en los aparatos del servicio.
2) Reservar los equipos desde la intranet del IIBB (usuarios internos) o a través de los responsables del servicio (usuarios externos).
3) Recibir la instrucción necesaria para el manejo de los equipos por parte del personal del IIBB hasta que el usuario y el personal lo consideren necesario. Una vez que el usuario pueda manejar el equipo sin asistencia técnica pasará a ser considerado como "usuario avanzado" de ese sistema.
4) Dejar limpios y protegidos los equipos y el material una vez finalizado su uso.
5) Dar aviso al personal técnico o responsable de cualquier incidencia o problema observado.
6) Respetar las normas de Seguridad.

El Servicio cuenta con un microscopio vertical de luz transmitida y alta resolución: Leica DM2000.
Cuenta con cámara dispuesta y software que permite la digitalización de la imagen para su posterior estudio.